CCK8/mtt/细胞增殖检测
细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础,对于肿瘤研究来说,细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等表型密切相关,同时也是分子生物学和药理学研究的重要内容之一。MTT或CCK8是常用的检测细胞增殖的方法,可以用于研究药物对细胞的毒性作用,或探究过表达或干扰细胞中某个基因对细胞增殖能力的影响,从而为进一步研究基因功能提供依据等。MTT技术的原理是MTT(噻唑蓝)能够穿过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的脱氢酶可以将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶,并沉积在细胞内,而死细胞没有这个功能;结晶物能够溶解于DMSO中,通过酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,从而间接反映出活细胞的数量(在一定范围内,光密度值越高,细胞活力越强)。CCK8技术的原理是CCK-8试剂中的WST-8在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下,能够被活细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色产物;通过酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可以间接反映出活细胞的数量(在一定范围内,生成的黄色产物数量与活细胞的数量成正比)。
技术原理
胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础,对于肿瘤研究来说,细胞增殖与细胞凋亡、细胞周期等表型密切相关,同时也是分子生物学和药理学研究的重要内容之一。MTT或CCK8是常用的检测细胞增殖的方法,可以用于研究药物对细胞的毒性作用,或探究过表达或干扰细胞中某个基因对细胞增殖能力的影响,从而为进一步研究基因功能提供依据等。MTT技术的原理是MTT(噻唑蓝)能够穿过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的脱氢酶可以将外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶,并沉积在细胞内,而死细胞没有这个功能;结晶物能够溶解于DMSO中,通过酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,从而间接反映出活细胞的数量(在一定范围内,光密度值越高,细胞活力越强)。CCK8技术的原理是CCK-8试剂中的WST-8在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-MethoxyPMS)的作用下,能够被活细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色产物;通过酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值,可以间接反映出活细胞的数量(在一定范围内,生成的黄色产物数量与活细胞的数量成正比)。
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